Enzymy restrykcyjne
Dodane przez pasqdnik dnia Czerwiec 05 2010 18:27:20
Enzymy Restrykcyjne- izoluje się z bakteri, gdzie pełnią f. obronne. Rozcinaja cząsteczki DNA obce dla danego organizmu. Własny DNA
zabezpieczony bo konce rozpoznawane przez restryktazy są zmetylowane.
Treść rozszerzona
Enzymy Restrykcyjne- izoluje się z bakteri, gdzie pełnią f. obronne. Rozcinaja cząsteczki DNA obce dla danego organizmu. Własny DNA
zabezpieczony bo konce rozpoznawane przez restryktazy są zmetylowane. Podział restryktaz według sekwencji rozpoznawanej :4kowe ,
rozpoznają sekwencję DNA złożoną z czterech nukleotydów. Statystycznie w dowolnym DNA takich miejsc jest dużo - co 256 bp.
Restryktazy takie mogą strawić DNA na bardzo małe kawałki. 6kowe , rozpoznają sekwencję DNA złożoną z sześciu nukleotydów.
Dowolne miejsce restrykcyjne złożone z sześciu nukleotydów występuje statystycznie co około 4096 bp w DNA , w którym ilości
poszczególnych nukleotydów są równe. Proporcje te zmieniają się w zależności od organizmu , dlatego dobór enzymu szóstkowego i
warunki należy ustalić eksperymentalnie. 8kowe , stosowane niezbyt często. Tną DNA bardzo rzadko. Inny podział: KLASA I- wymagają
atp, jonów Mg, S-adenozylometioniny. Rozpoznają specjalne sekwencje ale rozcinają cząsteczke w pewnej odległości od tej cząsteczki.
KLASA II- wymagają tylko jonów Mg, przecinają cząsteczkę DNA w obrębie rozpoznawanej sekwencji.
Lepkie konce: powstają wtedy gdy enzym restrykkcyjny przecina w częsteczce DNA nici w troche inntch miejscach. Np w jednej nici
przecine w pewnym miejscu a w drugiej nici miejsce cięcia jest przesunięte kilka zasad w jedną czy w drugą strone. mozna wykorzystac do
łatwiejszej ligacji. Fragmety DNA które chcemy połączyc, mieszamy a one łączą sie lepkimi koncami na zasadzie komplementarnosci. A
ligaza trwale je "skleja". Tępe końce nie posiadają jednoniciowych odcinków DNA, więc nie są przydatne do łączenia odcinków
komplementarnych i tworzenia DNA zrekombinowanego.
Budowa: składa się z 2 elementów
endonukleaza restrykcyjna, która rozpoznaje krótką, symetryczna sekwencji DNA i przecina szkielet każdej z nici DNA w specyficznym
miejscu. metylaza która dodaje grupę metylowa do zasady C lub w obrębie tej samej sekwencji komórkowego DNA. Zastosowanie:
uzyskanie fragmentów DNA do klonowania/badania genetyczne np. (RFLP.AFLP)/identyfikacja hybrydów, hybrydów/ badania
pokrewieństwa w kryminalistyce, identyfikacja mutacji. Kryteria czystości restryktaz
-trawienie DNA
-brak 3’ 5’ specyficznych nukleaz
-brak nukleaz specyficznych dla jednoniciowego DNA
-brak fosfataz
-homogennosć enzymu
Więcej na iuczelnia.edu.pl

W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia Państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczane w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies.